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高压制备色谱准备工作要做哪些

更新时间:2014-07-23      点击次数:1518
   制备色谱简单来说,就是在化学化工医药等广泛采用的层析法以及薄层色谱。本文介绍下高压制备色谱的目的以及需要做哪些准备工作。

  高压制备色谱的目的:

  制备色谱的目的,是从混合物中得到纯物质。为了加快分离的时间与提高分离的效率,制备色谱的的进样品量很大,导致制备色谱柱子的分离负荷的相应加大,也就必须加大色谱柱填料,增大制备色谱的直径和长度,使用的相对多的流动相。然而,当色谱柱上样品负载加大的时候,往往导致柱效急剧下降而得不到纯的产品。制备色谱,要解决容量与柱子效果之间的矛盾,对重现性也要考虑。从经济上来说,高压制备色谱要争取少用填料,少用溶剂,要尽可能多的得到产品。

  高压制备色谱需要做的部分准备工作:

  1.样品的前处理:高压制备色谱柱子由于处理的样品多,比分析柱子更容易受污染,所以必要的前处理就显得非常的必要。萃取、过滤、结晶、固相萃取等简单的分离方法,如果用得上,而且还不是很麻烦,就要尽可能多的采用以去掉杂质。

  2.固定相的选择:硅胶、键合固定相(如C18)、离子交换树脂、聚酰胺、氧化铝、凝胶等都可以作为色谱柱的填料。有不少文献报道,对填料可以进行一下处理提高了分离效果,如,对硅胶进行的硝酸银(或缓冲液)处理。

  3.装柱方法的选择:根据固定相颗粒度和柱子的尺寸,采用不同的装柱方法,往往装填越好分离效果越好。装柱效果跟填料的颗粒度关系很大,颗粒度的减少会导致装柱的难度。一般来说,颗粒直径小于20-30um的固定相采用湿法装填。所谓“敲击-装填”技术适用于颗粒直径大于25um的固定相。

  湿法的目的是迫使相对稀松的固定相悬浆以高速装入色谱柱子,从而减少空隙的形成。然而,当柱直径大于20mm,所加压力为30-40bar时,高压悬浆装填技术就变得十分复杂。为将小颗粒固定相装入更大得制备型色谱柱,可采用柱长压缩技术。这种方法,先将固定相悬浆(或偶尔是干填充物)装入柱中加压,利用物理方法将其压紧。

  压紧的方法有两种:径向压缩和轴向压缩。湿法装柱需要一定的设备,在柱子填完后,应用有柱效的测量,对柱效低的柱子应该重填。

  4.流动相的选择:除了和分析色谱同样的考虑外,在选用流动相时,要考虑色谱分离后面加有旋转蒸发等二次分离操作。一般来说,不宜采用高毒性溶剂,对13262cm奥马溶剂要尽可能的少用。如果产品中含有大量溶剂,溶剂的纯度也要考虑在其中。

  5.加样的方法:一般的进样方法有用注射器进样,用旋转阀进样,通过六通阀进样,通过主泵进样,通过辅泵进样,固体上样。

  6.泵的选用:根据有无脉冲、能承受的zui大压力、控制的精度、售后服务等来选择泵。

  7.检测器的选用:一般的分析池的zui大允许流速仅为5 mL/min 或者10mL/min。而专门的制备池的zui大允许流速可为150mL/min。有时,采用旁路分离管,将少量流体导入分析池进行检测,是一个不错的办法,但其浓度的误差会相对较大。

  其他还有产品收集,分离以及柱转换等等就不再一一详述了,如果您有兴趣了解更多高压制备色谱的信息,13262cm奥马·中国官方网站。

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